Hoe de analyse door middel van PCR uit te voeren: beschrijving van de procedure

Polymerase kettingreactie is al 30 jaar bekend. Het wordt veel gebruikt op vele gebieden, van archeologie tot genetica.

Het is de PCR-methode die helpt bij het vaststellen van vaderschap, maar meestal wordt het gebruikt om verschillende infectieziekten in het menselijk lichaam te identificeren.

Hoe wordt PCR-analyse uitgevoerd en wat is het? We zullen proberen deze vragen in detail te beantwoorden.

PCR-analyse - wat is het?

Polymerase kettingreactie (PCR) is een zeer nauwkeurige methode voor moleculaire genetische diagnostiek die het mogelijk maakt om verschillende besmettelijke en erfelijke ziekten bij mensen op te sporen, zowel in de acute als de chronische fase, en lang voordat de ziekte zich kan manifesteren.

De PCR-methode is absoluut specifiek en correct uitgevoerd kan geen vals positief resultaat geven. Dat wil zeggen, als er geen infectie is, zal de analyse nooit laten zien wat het is. Daarom is het nu heel vaak nodig dat de diagnose wordt goedgekeurd, een aanvullende PCR-analyse wordt uitgevoerd om de veroorzaker en de aard ervan te bepalen.

Polymerase kettingreactie (PCR) in 1983, ontwikkeld door Carey Mullys (VS), waarvoor hij in 1993 de Nobelprijs voor de chemie ontving.

Wat is het voordeel van deze methode?

Met behulp van deze methode kan men de ziekteverwekker direct in het gen vinden dat zich in de te bestuderen materialen bevindt. Dit is de meest nauwkeurige analyse van genitale infecties, latente infecties en verschillende geslachtsziekten.

Verschillen met PCR-diagnostiek ten opzichte van andere methoden voor laboratoriumonderzoek zijn als volgt:

  • de methode is gericht op het identificeren van de ziekteverwekker zelf;
  • PCR-diagnose is universeel: voor de detectie van verschillende pathogenen;
  • ziekten, is slechts één biologisch monster van de patiënt voldoende;
  • de methode is zeer gevoelig en gaat niet gepaard met andere kruisreacties.

Het voordeel van PCR-diagnostiek is bovendien dat elk biologisch materiaal van de patiënt geschikt is voor analyse: bloed, afscheiding uit de geslachtsorganen, urine, sperma.

Welke infecties kan een uitstrijkje op PCR onthullen?

Er kan een groot aantal ziekteverwekkers in het lichaam aanwezig zijn, waaronder 'verborgen', die zich lange tijd niet manifesteren.

De uitstrijkanalyse op PCR maakt het mogelijk om dergelijke infecties te detecteren:

  • hepatitis;
  • ureplazmoz geslachtsdelen;
  • candidiasis (spruw);
  • chlamydia van het geslachtsorgaan;
  • papillomavirusinfectie;
  • herpes;
  • de aanwezigheid van kankercellen;
  • mycoplasmose;
  • bacteriële vaginose;
  • infectieuze mononucleosis;
  • trichomoniasis;
  • evalueer de hormonale toestand;
  • AIDS (HIV).

Het testmateriaal voor PCR is meestal sputum, speeksel, urine en bloed. Voordat u de analyse uitvoert, moet u zich er zorgvuldig op voorbereiden, na een voorafgaand overleg met een arts.

Bloed voor PCR wordt meestal op een lege maag toegediend. Goede resultaten tonen analyse wanneer het materiaal voor het onderzoek uit het cervicale kanaal of de urethra wordt genomen. In dit geval is het het beste om PCR-diagnostiek uiterlijk een dag na geslachtsgemeenschap uit te voeren.

Rassen van PCR

PCR wordt op veel gebieden gebruikt voor analyse en in wetenschappelijke experimenten. Er zijn verschillende analysemethoden:

  1. Reverse transcription PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (English)) wordt gebruikt om een ​​bekende sequentie uit een RNA-bibliotheek te amplificeren, isoleren of identificeren.
  2. Omgekeerde PCR (omgekeerde PCR (Eng.)) - wordt gebruikt als slechts een klein gebied bekend is binnen de gewenste volgorde. Deze methode is vooral nuttig wanneer het noodzakelijk is om aangrenzende sequenties te bepalen na DNA-insertie in het genoom.
  3. Geneste PCR (geneste PCR) wordt gebruikt om het aantal reactiebijproducten te verminderen. Twee paar primers worden gebruikt en twee opeenvolgende reacties worden uitgevoerd.
  4. Asymmetrische PCR (Asymmetrische PCR) wordt uitgevoerd wanneer het nodig is om hoofdzakelijk een van de ketens van het oorspronkelijke DNA te amplificeren. Gebruikt in sommige sequencing- en hybridisatiebepalingen.
  5. Kwantitatieve PCR (Kwantitatieve PCR, Q-PCR (Eng.)) Of real-time PCR wordt gebruikt om direct de meting van de hoeveelheid van een specifiek PCR-product in elke reactiecyclus waar te nemen.
  6. Stap PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - met behulp van deze benadering wordt het effect van niet-specifieke primerbinding verminderd.
  7. Groepsspecifieke PCR (groepsspecifieke PCR) - PCR voor gerelateerde sequenties binnen dezelfde of tussen verschillende soorten, met behulp van conservatieve primers voor deze sequenties.

Als de nucleotidesequentie van de matrijs gedeeltelijk of onbekend is, is het mogelijk om gedegenereerde primers te gebruiken, waarvan de sequentie gedegenereerde posities bevat waarin zich basen kunnen bevinden. De primersequentie kan bijvoorbeeld zijn: ... ATH ..., waarbij H A, T of C is.

Welke biologische materialen worden onderzocht?

Het materiaal voor PCR-onderzoeken, waarin vreemd bacterieel DNA kan worden gedetecteerd, of het DNA of RNA van het virus, kan uit verschillende biologische media en menselijke vloeistoffen bestaan:

  1. Urine. Het kan worden gebruikt in infectieuze laesies van het urogenitale kanaal bij mannen en urinewegen bij vrouwen (bij mannen vervangt het gebruik van urine als materiaal epitheel schrapen).
  2. Sputum. Het wordt gebruikt om tuberculose te diagnosticeren en minder vaak om ademhalingsvormen van chlamydia en mycoplasmose te diagnosticeren. Sputum in een hoeveelheid van 15-20 ml wordt verzameld in een steriele (wegwerp) fles.
  3. Biologische vloeistoffen. Prostaatsap, pleura, hersenvocht, vruchtwater, gewrichtsvloeistof, bronchoalveolaire lavage, speeksel worden verzameld volgens indicaties.
  4. Epitheel schraapsel van slijmvliezen. Meestal gebruikt om seksueel overdraagbare aandoeningen (SOA's) te diagnosticeren, zoals gonorroe, chlamydia, mycoplasmose, ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellezis, herpes en andere infecties die de slijmvliezen aantasten.
  5. Biopsieën. De meest gebruikte biopsieën van de maag en de twaalfvingerige darm om Helicobacter pylori-infectie te identificeren.
  6. Bloed, plasma, serum. Gebruikt voor PCR-analyse van hepatitis B-, C-, D-, G-virussen, herpes, CMV, HIV, menselijke genen.

Hoe bereid je je voor op de analyse?

De betrouwbaarheid van het PCR-resultaat is direct afhankelijk van de juistheid van de levering van materiaal voor onderzoek. Het materiaal mag niet besmet zijn, anders is het resultaat van het onderzoek niet objectief. De belangrijkste aanbevelingen voordat een PCR-analyse wordt ingediend, zijn de volgende vereisten:

  1. Urine wordt 's ochtends in een steriele container afgeleverd.
  2. Een bloedtest voor infectie moet 's ochtends op een lege maag worden uitgevoerd.
  3. Het is niet nodig om seksuele activiteit de dag vóór de analyse te tonen.

Het resultaat van de analyse zal binnen 1,5-2 dagen na de procedure klaar zijn. Er zijn situaties waarin het resultaat op dezelfde dag kan worden voorbereid.

Decodering van de analyse van de CRP

Het interpretatieproces van het gepresenteerde onderzoek onderscheidt zich door zijn eenvoud. De resultaten van de PCR-analyse kunnen worden verkregen binnen 1,5-2x dagen na de levering van het materiaal. In sommige gevallen is het resultaat al op de eerste dag klaar en dit is wat ze kunnen betekenen:

  • Een negatief resultaat geeft aan dat het infectieuze agens ontbreekt in het materiaal dat wordt gediagnosticeerd.
  • Pcr-positief betekent dat het DNA of RNA van de ziekteverwekker in het menselijk lichaam aanwezig is.

In sommige gevallen, produceer een kwantitatieve bepaling van micro-organismen. Dit geldt met name voor ziekten die worden veroorzaakt door opportunistische micro-organismen. Omdat deze bacteriën hun negatieve invloed alleen vertonen bij overmatige hoeveelheden.

Ook is een kwantitatieve analyse van PCR belangrijk voor de keuze van therapeutische tactieken en om de behandeling van virale infecties zoals HIV en hepatitisvirussen te beheersen.

Hoe nauwkeurig is de PCR-diagnose van infecties?

De PCR-methode wordt gekenmerkt door een hoge nauwkeurigheid, specificiteit en gevoeligheid. Dit betekent dat deze analyse in staat is om:

  • nauwkeurig bepalen van de aanwezigheid of afwezigheid van infectie;
  • specificeer precies wat voor soort infectie (specificiteit);
  • infectie detecteren, zelfs met een zeer laag DNA-gehalte van microben in biologisch materiaal
  • die is onderworpen aan onderzoek (gevoeligheid).

PCR-analyse: prijs en tijd

De prijs van een specifieke analyse is afhankelijk van de infectie waarop u wordt gecontroleerd. Geschatte prijzen en voorwaarden:

  1. STI: 300-500 roebel, tijd - 1 dag;
  2. Epstein-Barr-virus, humaan papillomavirus, herpes, cytomegalovirus: 300-500 roebel, tijd - 1 dag;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: kwalitatieve analyse van 650 roebel, kwantitatieve analyse van 2000 roebel. Voorwaarden - maximaal 5 dagen;
  4. Antilichamen tegen het hepatitis C-virus, totaal (Anti-HCV) - 420 roebel;
  5. Antilichamen tegen het hepatitis C-virus, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 roebel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 roebel, voorwaarden - 1 dag;
  7. HIV (antilichamen en antigenen) - 380 roebel;
  8. HIV RNA, kwalitatief - 3500 roebel;
  9. HIV RNA, kwantitatief - 11.000 roebel.

Om geld te besparen, kunt u een vast pakket met analyses kiezen. Deze service wordt geleverd door de meeste klinieken waar het mogelijk is om de analyse door te geven met de ERP-methode (invitro, onclinics, etc.).

Bekijk de video: Electrophoresis: How to Read Results (Februari 2020).

Loading...

Laat Een Reactie Achter